ELISA試劑盒的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分互相吸附，并堅持其免疫學活性；
（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構成酶聯絡物，ELISA試劑盒而此種酶聯絡物仍能堅持其免疫學和酶學活性；
（3）酶聯絡物與相應抗原或抗體聯絡后，可依據參與底物的顏色反應來判定是不是有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯現試驗成果。法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所導致的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，ELISA試劑盒依據現已運用的成果，認為法具有活絡、特異、簡略、快速、安穩及易于自動化操作等特征。不只適用于臨床標本的檢查，而且由于一天以內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清盛行病學查詢。
ELISA試劑盒因此含雜質較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改進，重復性亦佳。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯絡的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的效果于。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時），以增加其吸附功能。例如，在檢查抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯絡。換言之，包被就是抗原或抗體聯絡到固相載體表面的進程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分露出，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以選用直接的捕獲包被法，即先將關于該抗原的特異抗體作預包被，這今后通過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參與生物素化的DNA，這種包被方法均勻、結實，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。