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干細胞的原代提取
發布時間： 2011-04-28 點擊次數： 2915次神經干細胞
目前，神經干細胞的分離方法主要有三種：無血清培養基自然篩選法、流式細胞術分選法、免疫磁珠分選法。
無血清培養基自然篩選法是迄今應用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養基使成熟的神經細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養條件下存活并繁殖的神經干細胞群體。步驟： （1）取胎腦；
（2）用吸管吹吸使細胞分散均勻；
（3）加小鼠神經干*培養基培養。脂肪間質干細胞
分離培養脂肪干細胞主要是通過膠原酶進行消化，獲得細胞懸液。分離培養大鼠脂肪間質干細胞的大致步驟如下：
（1）取腹股溝處脂肪，充分剪碎；
（2）加入膠原酶，將其轉移至離心管中進行消化30分鐘，加入培養基終止消化；
（3）離心，大鼠脂肪間質干細胞培養基重懸，接種至培養瓶中。骨髓間質干細胞
目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法。全骨髓貼壁法的原理是根據間質干細胞在低血清培養基中有貼壁優勢特性，定期換液除去不貼壁細胞，從而達到純化與擴增間質干細胞的目的。
步驟 : （1）取大鼠股骨和脛骨，以*培養基沖洗股骨和脛骨骨髓，轉移至離心管中，離心，去上清；
（2）大鼠骨髓間質干細胞培養基重懸，接種培養；
（3）原代培養36h全液量換液，去除未貼壁的造血細胞，以后每3天換液一次，直到細胞80-90融合傳代。
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