犬利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
 

犬利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

使用目的：
　　本試劑盒用于測(cè)定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）表達(dá)。
 

犬利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中犬利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中犬利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）的存在與否。
　　　試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：
　  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
　  臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
　  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）陰性
　  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為利什曼原蟲(chóng)抗體（Leishmania spp Ab）陽(yáng)性
　。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
CB0054-50g Cerium （III） chloride, heptahydrate 氯化鈰七水 [18618-55-8] 50g
C2139-25g Cerium （III） fluoride 氯化鈰 [7758-88-5] 25g
CB0283-50g Cerium（III） nitrate, hexahydrate 硝酸鈰 [10294-41-4] 50g
C2231-100g Cerium（IV） oxide 氧化鈰 [1306-38-3] 100g
CB0051-50g Cerium（III） sulfate, octahydrate 硫酸鈰八水 [13454-94-9] 50g
C2656-25g Cerium（IV） sulfate tetrahydrate 硫酸鈰四水 [10294-42-5] 25g
C2694-5g Cesium bromide 溴化銫 [7787-69-1] 5g
C2777-5g Cesium carbonate 碳酸銫 [534-17-8] 5g
CDB0054-50g Cesium chloride 氯化銫 [7647-17-8] 50g
CDB0054-250g Cesium chloride 氯化銫 [7647-17-8] 250g