ELISA試劑盒檢測試劑每次試驗、每塊扳上都要設(shè)置以下3項對照和用途：
1．空白對照：僅用稀釋液代替檢測樣本、ELISA試劑盒用來觀察zui終反應(yīng)的顯色“本底"、ELISA試劑盒并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底"，也就是說：以本底為“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值（A）；或者，在計算陰性對照均值（NCx）、陽性對照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早期的酶標(biāo)儀沒有自動扣除空白對照孔讀數(shù)的功能，ELISA試劑盒這種酶標(biāo)儀現(xiàn)在已經(jīng)被淘汰了，寫上這段話的目的是補(bǔ)充說明設(shè)置空白對照的用途。空白孔具體如何讀取讀數(shù)，應(yīng)該按照說明書操作。
2．陰性對照：
（1）陰性對照的含義與要求：ELISA試劑盒所謂陰性對照，是本次檢測試驗中采用與待檢測物（樣品、人用試劑就是人的血清等）具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并且能夠客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學(xué)試驗中有特異性抗原與抗體反應(yīng)）之間的差異。因此，用動物血清或其制品代替陰性人血清作為對照品，無論是從理論還是實踐上都是不可取的。注意：據(jù)我所知，國產(chǎn)ELISA試劑盒中，有的廠家是用動物血清制品稀釋配置或與部分人血清混合配置的；陰性對照讀數(shù)，并不是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，這是假象！試想一下，真正采用“陰性人血清"的陰性對照品，NCx值會如此之低嗎？例如，雅培乙肝六項ELISA試劑盒的NCx值，分別為：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個很簡單的方法，只要對比大量陰性樣本的實際讀數(shù)就“一目了然"啦！
（2）陰性對照分為兩類
一是受檢人血清中并不含有或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平，并且結(jié)果判斷值（Cut off）計算式中決定“是"（陽性）、或“否"（陰性）的*可變值。陰性對照值高，導(dǎo)致假陰性；反之，ELISA試劑盒導(dǎo)致假陽性。二是陰性對照設(shè)置，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品，ELISA試劑盒如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測抗—HBe、抗—HBc。或者，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照，ELISA試劑盒如檢測抗—HBc IgM。此類Cut off 值計算時，多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。