人II型膠原螺旋肽（HELIX-II）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人II型膠原螺旋肽（HELIX-II）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中II型膠原螺旋肽（HELIX-II）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 II 型膠原螺旋肽（HELIX-II）水平。用純化
的人 II 型膠原螺旋肽（HELIX-II）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
依次加入 II 型膠原螺旋肽（HELIX-II），再與 HRP 標記的 HELIX-II 抗體結合，形成抗體-
抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成
藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的 II 型膠原螺旋肽
（HELIX-II）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計
算樣品中人II型膠原螺旋肽（HELIX-II）濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（90nmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為60nmol/L，40nmol/L ，20nmol/L，10nmol/L， 5nmol/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混2
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
檢測范圍：
3nmol/L -80nmol/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月