此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，ELISA檢測試劑盒出現顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。如果您一直被所困擾，那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面ELISA檢測試劑盒、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。

    zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱為“酶聯物"、“結合物"（conjugate）；（3）酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、ELISA檢測試劑盒寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA試劑盒法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。